Home About us | Products Ordering Service Events References Contact | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Test procedure Diaglobal announces Services Downloads |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Use cases The three pillars of prevention Prevention/endurance sport Lipidopathy/lipid status Metabolic syndrome Diabetes/oral glucose tolerance test Training management in high performance sport Product information Blood sampling from ear lobes Point of Care - diagnostics Lactate Lactate-Rapid Protein CK Biodiesel Devices and diagnostics of other manufacturer |
Bestimmung von Lactat Diagnostische Bedeutung / Einsatzbereiche
Lactat (Salz der Milchsäure) ist
das Endprodukt des anaeroben Glucose-Stoffwechsels. Es wird verstärkt gebildet, wenn
die Körperzellen auf Grund eines Sauerstoffdefizits ihren Energiebedarf nicht
mehr aerob (unter Beteiligung von Sauerstoff) decken können. Mit der Anhäufung von Milchsäure
kommt es in den Zellen zu einem Abfall des pH-Wertes (Übersäuerung). Die
Absenkung des pH-Wertes verursacht eine Deaktivierung von Enzymen des
oxidativen Stoffwechsels, so daß die Energiegewinnung über den oxidativen Weg
weiter reduziert und der Abbau von Fettsäuren (Fettverbrennung) eingestellt
wird. Die von den Zellen an das Blut
vermehrt abgegebene Milchsäure bewirkt einen Anstieg des Blutlactatwertes.
Erhöhte Lactatspiegel sind somit in der Regel ein Indiz dafür, daß einzelne
Bereiche des Körpers unzureichend mit Sauerstoff versorgt werden. Die
Lactat-Bestimmung ist deshalb unverzichtbar in zahlreichen Notfallsituationen1-3,7,8): zur Beurteilung schwerer und akuter
Hypoxien, z.B. bei Schock, Herz-Kreislauf-versagen, Herzinsuffizienz,
Herzstillstand,
Daneben ist die Lactatbestimmung
bei einer Vielzahl entzündlicher, vaskulärer, metabolischer und neoplastischer
Erkrankungen des Gehirns (hier wird als Probenmaterial Liquor verwendet)5)
indiziiert. Erhöhte Lactatkonzentrationen im Blut finden sich ferner bei
angeborenen Enzymdefekten des aeroben Stoffwechsels6) sowie bei
übersteigerter Zufuhr von Alkali- und Kohlehydratinfusionen. Besondere Bedeutung hat die
Lactatmessung in der Sportmedizin erlangt. Lactat ist der wichtigste
Indikator zur Beurteilung der körperlichen Leistungsfähigkeit und wird im
Leistungs- und Breitensport zur Trainingssteuerung eingesetzt 9.10,11).
Bei körperlicher Betätigung steigt die Lactatkonzentration im Blut an. Anhand
der Lactatleistungskurve (Darstellung der Lactatkonzentration in Abhängigkeit
von der Belastungsstufe) kann der Trainingszustand des Sportlers beurteilt
werden. Je später der Lactatwert bei Belastung ansteigt, umso besser ist
derTrainingszustand. Es hat sich gezeigt, daß
Trainingserfolge nur dann zu verzeichnen sind, wenn die Lactatkonzentration im
Blut während desTrainings unterhalb der anaeroben Schwelle (in der Regel 4
mmol/l) bleibt. Längere körperliche Aktivitäten im anaeroben Bereich mindern
die Leistungsfähigkeit und erhöhen die Verletzungsgefahr. Weitere wichtige Einsatzgebiete für
das hier vorgestellte Lactat-Photometer ergeben sich im Fitnessbereich12),
im Freizeit- und Behindertensport sowie in der Rehabilitation. Veterinärmedizin: Das
lactatgesteuerte Training findet inzwischen auch im Pferdesport Anwendung und
selbst die Fleischwirtschaft hat die Bedeutung von Lactatmessungen erkannt13,14).
Denn aufgrund gesteigerter Lactatproduktion übersäuertes Fleisch gilt als
minderwertig . Durch Kontrolle der Lactatkonzentration im Blut des
Schlachttieres kann somit ein optimaler Schlachtzeitpunkt festgelegt werden. Methodik
Die Lactat-Bestimmung mit dem
Diaglobal Lactat-Photometer basiert auf der LOD-PAP-Methode15), der
das folgende Reaktionsprinzip zugrunde liegt.
LOD = Lactatoxidase, POD =
Peroxidase
Lactat wird mit Hilfe des Enzyms
Lactatoxidase zu Pyruvat oxidiert. Das hierbei entstehende H2O2
reagiert unter dem Einfluß von Peroxidase mit 4-Amino-phenazon und
4-Chlorphenol unter Bildung eines Chinoniminfarbstoffes, der bei 520 nm
gemessen wird. Pro Bestimmung werden 10 µl Probe
benötigt. Blut wird durch das Reagenz
vollständig hämolysiert. Das Reagenz enthält eine
wirkungsvolle Kombination von Glykolysehemmstoffen, die den Abbau von Glucose zu Lactat im
Hämolysat verhindert. Probenmaterial
Kapillar- oder EDTA-Blut (venös),
EDTA-oder Heparin-Plasma, Liquor Serum ist zur Bestimmung
ungeeignet. In der Sportmedizin wird
ausschließlich aus dem Ohrläppchen gewonnenes Kapillarblut zur Bestimmung
eingesetzt. Blut muß sofort nach Abnahme in die
Einzeltestküvette pipettiert werden. Haltbarkeit* der hämolysierten
Probe in der Pufferlösung
* Anstieg der Lactatkonzentration < 5 %
Zur Gewinnung von Plasma ca. 2 ml
Blut mit 2 Tropfen Fluorid/EDTA mischen und innerhalb von 2 Stunden ca. 5
Minuten bei 3000 U/min zentrifugieren Stabilität des Lactats im
abdekantierten Überstand:
Testdurchführung und Gerätebedienung
Testdurchführung und
Gerätebedienung entnehmen Sie bitte der Packungsbeilage, dem Flyer
"Lactat-Messung Schritt für Schritt" bzw. der
Gerätebedienungsanleitung. Meßbedingungen
Ergebnisberechnung / Kalibration
Die Ergebnisberechnung wird mittels
abgespeicherter Algorithmen vom Gerät selbsttätig durchgeführt. Die für die Berechnung
benötigten Kalibrationskonstanten wurden unter Verwendung gravimetrisch
eingestellter Standards werkseitig bestimmt. Temperatureinfluß
Zu den wichtigsten Forderungen, die
an ein Vor-Ort-Gerät zu stellen sind, gehört die Einsatzmöglichkeit in einem
weiten Temperaturbereich. Voraussetzung hierfür ist, dass die gemessenen Werte
keine Abhängigkeit von der Temperatur in diesem Bereich zeigen. Diese Bedingung wird, wie aus Abb.
1 ersichtlich, vom Diaglobal Lactat-Photometer erfüllt. Abb. 1: Diaglobal Lactat Photometer plus, Einfluß der Temperatur auf die
Meßwerte
Da das Gerät den Endpunkt der
Farbreaktion selbsttätig erkennt, ergeben sich in Abhängigkeit von der
Temperatur unterschiedliche Messzeiten. Erfahrungswerte: 15-16°C: 5'
20" ; 22-23°C: 4' 20"; 30°C: 3' 20". Unterhalb 10°C verlangsamt sich die
Reaktion stark . In der Nähe des Gefrierpunktes muß mit Messzeiten von 12 bis
20 Minuten gerechnet werden. In diesen Fällen empfiehlt es sich, das Reagenz in
den Küvetten durch Körperkontakt vorzuwärmen. Eingefrorenes Reagenz ist
verwendbar, muß jedoch vor Gebrauch aufgetaut werden. Leistungsdaten des Tests
Präzision
Bei den von uns durchgeführten
Untersuchungen wurden auch von angelernten Personen (ohne Laborausbildung)
VK-Werte < 3,0 % erreicht. Typische Werte sind nachfolgend
wiedergegeben.
Wiederfindung / Linearität
Die Richtigkeit wurde durch
Wiederfindungsversuche sowie durch Vergleichsmessungen mit anerkannten
Routinemethoden überprüft. Beim Arbeiten mit Blut kommt
Wiederfindungsversuchen eine besondere Bedeutung zu, da sie eine Beurteilung
evtl. vorhandener durch die Blutmatrix bedingter Interferenzen gestatten. Beispielhaft sind in Abb. 2 und 3
Ergebnisse aus Untersuchungen mit aufgestockten EDTA-Bluten wiedergegeben. Es
besteht ein linearer Zusammenhang zwischen zugesetzter und wiedergefundener
Lactatmenge. Die ermittelten Geraden sind um den Lactatwert des für den
Aufstockversuch verwendeten Blutes gegen die Winkelhalbierende verschoben. Abb 2 : Lineare Regression: y = 1,29 + 1,015
Abb.3 :S x y = 5,88 +
1,012x
Die von uns ermittelten
Wiederfindungsraten lagen im Bereich 95 - 105 %. Methodenvergleiche
Methodenvergleiche wurden mit
Plasma und Blut durchgeführt. Plasma
Der Vergleich mit dem UV-Test der
Firma Sigma ergab eine gute Übereinstimmung zwischen beiden Methoden. Die Ergebnisse
sind in Abb. 3 graphisch dargestellt. Abb. 4: Methodenvergleich Diaglobal Lactat Photometer plus (y) – UV-Methode
mit Enteiweißung (x); Sigma Diagnostics 826-B, Probenmaterial: Plasma
Die Regressionsanalyse nach dem
Verfahren von Passing-Bablok 19) lieferte die Geradengleichung : y =
- 0,05 + 1,020x (r = 0,999; N = 32) Blut
Bei Einsatz von Blut ist zu berücksichtigen,
dass Hämolysatmethoden, wie die hier beschriebene, neben dem Plasmalactat auch
das in den Erythrocyten enthaltene Lactat messen. Bestimmungsmethoden, die bei
Einsatz von Blut nur den Lactatanteil des Plasmas erfassen, ergeben deshalb
(nach unseren Erfahrungen um 10 - 20 %) tiefere Werte. In diesem Zusammenhang sei auf die
Arbeiten von Foxdahl et.al. verwiesen17,18). Bei Enteiweißungsmethoden ist zu
beachten, dass bestimmte Enteiweißungsmittel (z.B.
Perchlorsäure/Perchlorat-Mischungen) keine Hämolyse bewirken. Methodenvergleiche wurden mit einer
bereits im Markt etablierten photometrischen Hämolysatmethode sowie mit dem
UV-Test durchgeführt. Die Ergebnisse sind in den Abb. 5 und 6 dargestellt. Abb. 5: Methodenvergleich Diaglobal Lactat Photometer plus (y) –
Photometrische Hämolysatmethode (x); LP 20 - Dr. Lange GmbH, Probenmaterial:
Kapillarblut
Regressionsanalyse (Passing Bablok) : y = 0,028 + 1,016x (r = 0,998 n = 46) Wie aus der Literatur bekannt15,16),
zeigt die o.g. photometrische Hämolysatmethode auch bei Einsatz von Blut eine
gute Übereinstimmung mit der UV-Methode. Diese Aussage konnte für das
Diaglobal Photometer bestätigt werden (Abb. 6). Abb. 6: Methodenvergleich Diaglobal Lactat Photometer plus (y) - UV-Test m.
Enteiweißung (x); Sigma Diagnostics 826-B Probenmaterial: EDTA-Blut
Regressionsanalyse (Passing Bablok) : y = 0,035 + 0,994x (r = 0,997 n =
46)? Ein Methodenvergleich mit der
amperometrischen Methode (die Messung erfolgt hier ebenfalls im Hämolysat) ist
in Arbeit. Sensitivität (analytische Nachweisgrenze)
Nachweisgrenze: 0,2 mmol/l Die untere Nachweisgrenze
entspricht der niedrigsten messbaren Lactat-Konzentration, die von Null
unterschieden werden kann. Sie wird aus der dreifachen Standardabweichung von
Messungen des niedrigsten Standards berechnet. Interferenzen
Keine Störung durch Lipämie und
Bilirubin (bis 10 mg/dl) Eine Beurteilung der
Messwertbeeinflussung durch Pharmaka wurde an Hand der einschlägigen Literatur
vorgenommen20). Dopamin (10 mg/l), Levadopa (20 mg/l) und Methyldopa
(20 mg/l) täuschen erniedrigte Lactatwerte vor. Qualitätskontrolle
Interne Qualitätskontrolle
Für die Richtigkeitskontrolle der
Lactat-Bestimmung eignet sich das Diaglobal-Kontrollset Best-Nr. LAC QS mit
Zielwerten in den Bereichen 2, 4 und 10 mmol/l. Darüberhinaus können zur
Richtigkeitskontrolle die Kontrollsera der Firma Diaglobal
verwendet werden. Externe Qualitätskontrolle
Für den Parameter Lactat besteht
auch im klinischen Bereich keine Pflicht zur Teilnahme an Ringversuchen
(entsprechend den Richtlinien der Bundesärztekammer). Es werden jedoch von der
Referenzinstitution INSTAND und der DGKC (Deutsche Gesellschaft für Klinische
Chemie) Ringversuche auf freiwilliger Basis angeboten. Die Firma Diaglobal beteiligt sich
mit dem Lactat-Photometer und dem zugehörigen Kit LAC 142 regelmäßig an den
Ringversuchen dieser beiden Institutionen. Die nachfolgend wiedergegebenen
Ergebnisse belegen die hohe Qualität des in dieser Produktinformation
beschriebenen Meßsystems. Tab. Ringversuchsergebnisse Lactat (Zeitraum: August 2000 - März 2001)
D= Abweichung, Dmax = max zulässige Abweichung; Zertifikat wird erteilt,
wenn D < I1,0I
|