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Produktinformation LactatAusgabe 01/04-01 Geräte:DP 110 - Lactat Photometer plus DP 300 - Vario Photometer Reagenz:LAC 142 - 40 Tests zur Bestimmung von Lactat Bestimmung von LactatDiagnostische Bedeutung / EinsatzbereicheLactat (Salz der Milchsäure) ist das Endprodukt des anaeroben Glucose-Stoffwechsels. Es wird verstärkt gebildet, wenn die Körperzellen auf Grund eines Sauerstoffdefizits ihren Energiebedarf nicht mehr aerob (unter Beteiligung von Sauerstoff) decken können. Mit der Anhäufung von Milchsäure kommt es in den Zellen zu einem Abfall des pH-Wertes (Übersäuerung). Die Absenkung des pH-Wertes verursacht eine Deaktivierung von Enzymen des oxidativen Stoffwechsels, so daß die Energiegewinnung über den oxidativen Weg weiter reduziert und der Abbau von Fettsäuren (Fettverbrennung) eingestellt wird. Die von den Zellen an das Blut vermehrt abgegebene Milchsäure bewirkt einen Anstieg des Blutlactatwertes. Erhöhte Lactatspiegel sind somit in der Regel ein Indiz dafür, daß einzelne Bereiche des Körpers unzureichend mit Sauerstoff versorgt werden. Die Lactat-Bestimmung ist deshalb unverzichtbar in zahlreichen Notfallsituationen1-3,7,8): zur Beurteilung schwerer und akuter Hypoxien, z.B. bei Schock, Herz-Kreislauf-versagen, Herzinsuffizienz, Herzstillstand,
Daneben ist die Lactatbestimmung bei einer Vielzahl entzündlicher, vaskulärer, metabolischer und neoplastischer Erkrankungen des Gehirns (hier wird als Probenmaterial Liquor verwendet)5) indiziiert. Erhöhte Lactatkonzentrationen im Blut finden sich ferner bei angeborenen Enzymdefekten des aeroben Stoffwechsels6) sowie bei übersteigerter Zufuhr von Alkali- und Kohlehydratinfusionen. Besondere Bedeutung hat die Lactatmessung in der Sportmedizin erlangt. Lactat ist der wichtigste Indikator zur Beurteilung der körperlichen Leistungsfähigkeit und wird im Leistungs- und Breitensport zur Trainingssteuerung eingesetzt 9.10,11). Bei körperlicher Betätigung steigt die Lactatkonzentration im Blut an. Anhand der Lactatleistungskurve (Darstellung der Lactatkonzentration in Abhängigkeit von der Belastungsstufe) kann der Trainingszustand des Sportlers beurteilt werden. Je später der Lactatwert bei Belastung ansteigt, umso besser ist derTrainingszustand. Es hat sich gezeigt, daß Trainingserfolge nur dann zu verzeichnen sind, wenn die Lactatkonzentration im Blut während desTrainings unterhalb der anaeroben Schwelle (in der Regel 4 mmol/l) bleibt. Längere körperliche Aktivitäten im anaeroben Bereich mindern die Leistungsfähigkeit und erhöhen die Verletzungsgefahr. Weitere wichtige Einsatzgebiete für das hier vorgestellte Lactat-Photometer ergeben sich im Fitnessbereich12), im Freizeit- und Behindertensport sowie in der Rehabilitation. Veterinärmedizin: Das lactatgesteuerte Training findet inzwischen auch im Pferdesport Anwendung und selbst die Fleischwirtschaft hat die Bedeutung von Lactatmessungen erkannt13,14). Denn aufgrund gesteigerter Lactatproduktion übersäuertes Fleisch gilt als minderwertig . Durch Kontrolle der Lactatkonzentration im Blut des Schlachttieres kann somit ein optimaler Schlachtzeitpunkt festgelegt werden. MethodikDie Lactat-Bestimmung mit dem Diaglobal Lactat-Photometer basiert auf der LOD-PAP-Methode15), der das folgende Reaktionsprinzip zugrunde liegt.
LOD = Lactatoxidase, POD = PeroxidaseLactat wird mit Hilfe des Enzyms Lactatoxidase zu Pyruvat oxidiert. Das hierbei entstehende H2O2 reagiert unter dem Einfluß von Peroxidase mit 4-Amino-phenazon und 4-Chlorphenol unter Bildung eines Chinoniminfarbstoffes, der bei 520 nm gemessen wird. Pro Bestimmung werden 10 µl Probe benötigt. Blut wird durch das Reagenz vollständig hämolysiert. Das Reagenz enthält eine wirkungsvolle Kombination von Glykolysehemmstoffen, die den Abbau von Glucose zu Lactat im Hämolysat verhindert. ProbenmaterialKapillar- oder EDTA-Blut (venös), EDTA-oder Heparin-Plasma, Liquor Serum ist zur Bestimmung ungeeignet. In der Sportmedizin wird ausschließlich aus dem Ohrläppchen gewonnenes Kapillarblut zur Bestimmung eingesetzt. Blut muß sofort nach Abnahme in die Einzeltestküvette pipettiert werden. Haltbarkeit* der hämolysierten Probe in der Pufferlösung
* Anstieg der Lactatkonzentration < 5 %Zur Gewinnung von Plasma ca. 2 ml Blut mit 2 Tropfen Fluorid/EDTA mischen und innerhalb von 2 Stunden ca. 5 Minuten bei 3000 U/min zentrifugieren Stabilität des Lactats im abdekantierten Überstand:
Testdurchführung und GerätebedienungTestdurchführung und Gerätebedienung entnehmen Sie bitte der Packungsbeilage, dem Flyer "Lactat-Messung Schritt für Schritt" bzw. der Gerätebedienungsanleitung. Meßbedingungen
Ergebnisberechnung / KalibrationDie Ergebnisberechnung wird mittels abgespeicherter Algorithmen vom Gerät selbsttätig durchgeführt. Die für die Berechnung benötigten Kalibrationskonstanten wurden unter Verwendung gravimetrisch eingestellter Standards werkseitig bestimmt. TemperatureinflußZu den wichtigsten Forderungen, die an ein Vor-Ort-Gerät zu stellen sind, gehört die Einsatzmöglichkeit in einem weiten Temperaturbereich. Voraussetzung hierfür ist, dass die gemessenen Werte keine Abhängigkeit von der Temperatur in diesem Bereich zeigen. Diese Bedingung wird, wie aus Abb. 1 ersichtlich, vom Diaglobal Lactat-Photometer erfüllt. Abb. 1: Diaglobal Lactat Photometer plus, Einfluß der Temperatur auf die MeßwerteDa das Gerät den Endpunkt der Farbreaktion selbsttätig erkennt, ergeben sich in Abhängigkeit von der Temperatur unterschiedliche Messzeiten. Erfahrungswerte: 15-16°C: 5' 20" ; 22-23°C: 4' 20"; 30°C: 3' 20". Unterhalb 10°C verlangsamt sich die Reaktion stark . In der Nähe des Gefrierpunktes muß mit Messzeiten von 12 bis 20 Minuten gerechnet werden. In diesen Fällen empfiehlt es sich, das Reagenz in den Küvetten durch Körperkontakt vorzuwärmen. Eingefrorenes Reagenz ist verwendbar, muß jedoch vor Gebrauch aufgetaut werden. Leistungsdaten des TestsPräzisionBei den von uns durchgeführten Untersuchungen wurden auch von angelernten Personen (ohne Laborausbildung) VK-Werte < 3,0 % erreicht. Typische Werte sind nachfolgend wiedergegeben.
Wiederfindung / LinearitätDie Richtigkeit wurde durch Wiederfindungsversuche sowie durch Vergleichsmessungen mit anerkannten Routinemethoden überprüft. Beim Arbeiten mit Blut kommt Wiederfindungsversuchen eine besondere Bedeutung zu, da sie eine Beurteilung evtl. vorhandener durch die Blutmatrix bedingter Interferenzen gestatten. Beispielhaft sind in Abb. 2 und 3 Ergebnisse aus Untersuchungen mit aufgestockten EDTA-Bluten wiedergegeben. Es besteht ein linearer Zusammenhang zwischen zugesetzter und wiedergefundener Lactatmenge. Die ermittelten Geraden sind um den Lactatwert des für den Aufstockversuch verwendeten Blutes gegen die Winkelhalbierende verschoben. Abb 2 : Lineare Regression: y = 1,29 + 1,015Abb.3 :S x y = 5,88 + 1,012xDie von uns ermittelten Wiederfindungsraten lagen im Bereich 95 - 105 %. MethodenvergleicheMethodenvergleiche wurden mit Plasma und Blut durchgeführt. PlasmaDer Vergleich mit dem UV-Test der Firma Sigma ergab eine gute Übereinstimmung zwischen beiden Methoden. Die Ergebnisse sind in Abb. 3 graphisch dargestellt. Abb. 4: Methodenvergleich Diaglobal Lactat Photometer plus (y) – UV-Methode mit Enteiweißung (x); Sigma Diagnostics 826-B, Probenmaterial: PlasmaDie Regressionsanalyse nach dem Verfahren von Passing-Bablok 19) lieferte die Geradengleichung : y = - 0,05 + 1,020x (r = 0,999; N = 32) BlutBei Einsatz von Blut ist zu berücksichtigen, dass Hämolysatmethoden, wie die hier beschriebene, neben dem Plasmalactat auch das in den Erythrocyten enthaltene Lactat messen. Bestimmungsmethoden, die bei Einsatz von Blut nur den Lactatanteil des Plasmas erfassen, ergeben deshalb (nach unseren Erfahrungen um 10 - 20 %) tiefere Werte. In diesem Zusammenhang sei auf die Arbeiten von Foxdahl et.al. verwiesen17,18). Bei Enteiweißungsmethoden ist zu beachten, dass bestimmte Enteiweißungsmittel (z.B. Perchlorsäure/Perchlorat-Mischungen) keine Hämolyse bewirken. Methodenvergleiche wurden mit einer bereits im Markt etablierten photometrischen Hämolysatmethode sowie mit dem UV-Test durchgeführt. Die Ergebnisse sind in den Abb. 5 und 6 dargestellt. Abb. 5: Methodenvergleich Diaglobal Lactat Photometer plus (y) – Photometrische Hämolysatmethode (x); LP 20 - Dr. Lange GmbH, Probenmaterial: KapillarblutRegressionsanalyse (Passing Bablok) : y = 0,028 + 1,016x (r = 0,998 n = 46) Wie aus der Literatur bekannt15,16), zeigt die o.g. photometrische Hämolysatmethode auch bei Einsatz von Blut eine gute Übereinstimmung mit der UV-Methode. Diese Aussage konnte für das Diaglobal Photometer bestätigt werden (Abb. 6). Abb. 6: Methodenvergleich Diaglobal Lactat Photometer plus (y) - UV-Test m. Enteiweißung (x); Sigma Diagnostics 826-B Probenmaterial: EDTA-BlutRegressionsanalyse (Passing Bablok) : y = 0,035 + 0,994x (r = 0,997 n = 46)? Ein Methodenvergleich mit der amperometrischen Methode (die Messung erfolgt hier ebenfalls im Hämolysat) ist in Arbeit. Sensitivität (analytische Nachweisgrenze)Nachweisgrenze: 0,2 mmol/l Die untere Nachweisgrenze entspricht der niedrigsten messbaren Lactat-Konzentration, die von Null unterschieden werden kann. Sie wird aus der dreifachen Standardabweichung von Messungen des niedrigsten Standards berechnet. InterferenzenKeine Störung durch Lipämie und Bilirubin (bis 10 mg/dl) Eine Beurteilung der Messwertbeeinflussung durch Pharmaka wurde an Hand der einschlägigen Literatur vorgenommen20). Dopamin (10 mg/l), Levadopa (20 mg/l) und Methyldopa (20 mg/l) täuschen erniedrigte Lactatwerte vor. QualitätskontrolleInterne QualitätskontrolleFür die Richtigkeitskontrolle der Lactat-Bestimmung eignet sich das Diaglobal-Kontrollset Best-Nr. LAC QS mit Zielwerten in den Bereichen 2, 4 und 10 mmol/l. Darüberhinaus können zur Richtigkeitskontrolle die Kontrollsera der Firma Diaglobal
verwendet werden. Externe QualitätskontrolleFür den Parameter Lactat besteht auch im klinischen Bereich keine Pflicht zur Teilnahme an Ringversuchen (entsprechend den Richtlinien der Bundesärztekammer). Es werden jedoch von der Referenzinstitution INSTAND und der DGKC (Deutsche Gesellschaft für Klinische Chemie) Ringversuche auf freiwilliger Basis angeboten. Die Firma Diaglobal beteiligt sich mit dem Lactat-Photometer und dem zugehörigen Kit LAC 142 regelmäßig an den Ringversuchen dieser beiden Institutionen. Die nachfolgend wiedergegebenen Ergebnisse belegen die hohe Qualität des in dieser Produktinformation beschriebenen Meßsystems. Tab. Ringversuchsergebnisse Lactat (Zeitraum: August 2000 - März 2001)
D= Abweichung, Dmax = max zulässige Abweichung; Zertifikat wird erteilt, wenn D < I1,0I
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